دانشگاه لرستان بهداشت و بیماری‌های عفونی دام 3041-9697 3 1 2026 06 26 Cloning of the Matrix Protein (M1) Gene of H9N2 Avian Influenza Virus into the pTZ57R/T Vector کلون‌سازی ژن پروتئین ماتریکس (M1) ویروس آنفلوآنزای پرندگان تحت‌تیپ H9N2 در ناقل pTZ57R/T 91 97 737867 10.22034/jahid.2026.2092554.1075 FA شیرین محمدی پور گروه پاتوبیولوژی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه شهید باهنر کرمان، کرمان، ایران 0009-0001-5643-5885 هادی توکلی گروه علوم بالینی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه شهید باهنر کرمان، کرمان، ایران 0009-0001-5643-5885 سعیده افریشم گروه پاتوبیولوژی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه شهید باهنر کرمان، کرمان، ایران 0009-0001-5643-5885 شیدا شربیانی گروه زیست‌شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه آزاد اسلامی واحد رشت، رشت، ایران 0009-0004-1547-8004 معصومه عابد گروه زیست‌شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه آزاد اسلامی واحد رشت، رشت، ایران 0009-0005-8990-5379 محمد امیر اسمعیلی دانشکده دامپزشکی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد ارومیه، ارومیه، ایران 0009-0001-5643-5885 قدیر شهبازی گروه بهداشت مواد غذایی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد شبستر، شبستر، ایران 0009-0001-5643-5885 Journal Article 2026 05 09 Abstract<br>Background and Aim: The matrix protein 1 (M1) is one of the most conserved structural proteins among different influenza virus subtypes and plays a critical role in viral assembly, replication, and pathogenicity. Due to its high degree of conservation, the M1 gene represents an attractive target for molecular studies and diagnostic assay development. The present study aimed to clone a fragment of the M1 gene of the H9N2 avian influenza virus into the pTZ57R/T cloning vector.<br>Methods: Following propagation of the H9N2 avian influenza virus in embryonated chicken eggs, viral RNA was extracted from harvested allantoic fluid. The target M1 gene fragment was amplified by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR). The amplified product was purified and subsequently ligated into the pTZ57R/T plasmid vector. Recombinant plasmids were transformed into Escherichia coli XL1-Blue competent cells and propagated for plasmid amplification. Recombinant clones were identified and confirmed using standard molecular techniques.<br>Results: Successful amplification, cloning, and propagation of the M1 gene fragment were achieved. The pTZ57R/T vector in combination with E. coli XL1-Blue provided an efficient system for cloning and maintenance of the target gene. The recombinant construct remained stable and yielded sufficient quantities of plasmid DNA for subsequent molecular applications.<br>Conclusion: The successful cloning of the M1 gene of the H9N2 avian influenza virus provides a valuable genetic resource for future molecular investigations. The recombinant construct may serve as a suitable template for the development of diagnostic assays and further studies on the molecular biology and pathogenesis of influenza A viruses. زمینه و هدف<br>پروتئین M1 به‌عنوان یکی از پروتئین‌های بسیار حفاظت‌شده در میان زیرگونه‌های مختلف ویروس‌های آنفلوآنزا شناخته می‌شود و این موضوع اهمیت و جایگاه آن را در حوزهٔ ویروس‌شناسی برجسته می‌کند. هدف اصلی این پروژهٔ پژوهشی، کلون‌سازی دقیق و منظم یک بخش خاص از ژنی است که مسئول کُد کردن پروتئین M1 مرتبط با ویروس آنفلوآنزا زیرگونه H9N2 می‌باشد.<br><br>روش‌ها<br>پس از تکثیر ویروس آنفلوآنزا در تخم‌مرغ‌های جنین‌دار مرغ، RNA از نمونه‌های ویروسی جمع‌آوری‌شده در طی این فرایند آزمایشی استخراج شد. سپس توالی نوکلئوتیدی اختصاصی مربوط به ژن M1 با استفاده از تکنیک واکنش زنجیره‌ای پلیمراز با رونویسی معکوس (RT‑PCR) تکثیر شد. پس از تکثیر توالی، یک فرایند خالص‌سازی کامل برای اطمینان از یکپارچگی و کیفیت آن انجام شد. توالی خالص‌سازی‌شده سپس در وکتور پلاسمیدی ptZ57R/T، که به‌طور ویژه برای چنین کاربردهایی طراحی شده است، کلون شد. پس از کلون‌سازی، محصول حاصل با استفاده از زیرگونهٔ Escherichia coli سویهٔ xl1‑blue که به‌دلیل کارایی بالا در فرایندهای کلونینگ شناخته می‌شود، تکثیر و مجدداً خالص‌سازی گردید.<br><br>نتایج<br>نتایج این مطالعه به‌وضوح نشان می‌دهد که زیرگونهٔ E. coli (xl1‑blue) در کنار سیستم پلاسمیدی ptZ57R/T می‌تواند به‌طور مؤثر برای جداسازی، کلون‌سازی و تکثیر موفق ژن‌های مرتبط با ویروس‌های آنفلوآنزا به‌کار گرفته شود؛ همچنین ژن‌هایی که پروتئین M1 را کُد می‌کنند و به‌عنوان یک عامل ضروری در پاتوژنز ویروس‌های influenza A شناخته می‌شوند.<br><br>نتیجه گیری<br>این رویکرد، اطلاعات و پیشرفت‌های مهمی را در حوزهٔ ژنتیک ویروسی فراهم می‌کند و در نتیجه، درک ما را از سازوکارهای ژنتیکی کنترل‌کنندهٔ رفتار و پاتولوژی ویروس آنفلوآنزا عمیق‌تر می‌سازد. https://jahid.lu.ac.ir/article_737867_90de81533407f9afb1d26d8cf744751e.pdf